圆二色光谱(简称CD)是应用广泛的测定蛋白质二级结构的方法,是研究稀溶液中蛋白质构象的一种快速、简单、较准确的方法。它可以在溶液状态下测定,较接近其生理状态。而且测定方法快速简便,对构象变化灵敏,所以它是目前研究蛋白质二级结构的主要手段之一,并已广泛应用于蛋白质的构象研究中。
圆二色光谱仪的测试注意事项
(1) 在标准操作时,谱带宽度选为1 nm。对于高分辨率测量,要用较窄的狭缝宽度,此时光电倍增管的电压较高,谱的信噪比差。虽然对于正常测量最佳谱带宽度是1~2 nm,但是在下列情况下要牺牲分辨率而需要较宽的狭缝宽度。当样品的吸光度很高但CD信号很弱时,一方面要尽量保证测定CD峰所需要的足够浓度,另一方面要设置较宽的狭缝。不过此时要特别小心,因为样品在吸光度过高(A>2)的情况下可能存在荧光或杂散光引起的某些假象。另外,在固体CD光谱测试时也需要较大的狭缝宽度(一般要求 > 2 nm)。
(2)椭圆率和摩尔椭圆率都依赖于测量条件。因此,温度、波长和样品浓度总是应该特别注明的。
(3) 当用压片法或石蜡油研磨法进行固体粉末样品测试时,要尽可能地研磨获得细小均匀的样品颗粒。采用石蜡油糊方法时,必须注意某些憎水有机化合物可能溶于石蜡油中,这时所得CD光谱在某种意义上应视为溶液CD光谱。采用压片法测试固体CD时,在保证手性样品的定性浓度达到CD光谱仪检测要求的同时,片越薄越透明越好(但切忌破损)。在某些情况下,压片法不适用于手性抗衡阴离子存在下的固体诱导CD光谱的测定。
圆二色光谱仪使用时发生故障怎么做
1、仪器发生故障时应及时报告技术人员处理.仪器发生异常现象时,马上关闭电源,保护现场并及时上报。
2、不乱按键盘,操作人员不得进入操作规程规定以外的任何程序,不得按规定以外的任何功能键.卸下火花台板时要轻拿轻放,防止内表面划伤.取出火花室内圆石英垫片和玻璃套管时务必谨慎小心,防止操作不当致其破碎。
3、压样品夹子要垂直,不得在未夹好样品时按激发键,不得在激发时触摸或抬起样品夹.如果遇到激发时声音很大,应该按F3键停止,不允许直接抬起样品夹,否则易造成电路板烧毁。
4、激发样品后在火花台内产生黑色沉积物可导致电极与火花台之间短路,所以火花台应定期清理。
5、非岗位人员不得随便进入机房,机房内禁止吸烟,吃食物。
6、如果遇到突然断电时,应先关总,再将其它电源关闭,等到来电后,按规程条款进行开机操作。